Apa saja ciri-ciri dasar plasmid?

Pada dasarnya, plasmid adalah molekul DNA melingkar kecil yang mampu bereplikasi secara independen. Dengan demikian, mereka tidak bergantung pada DNA kromosom organisme untuk replikasi. Karena karakteristik ini, mereka juga disebut sebagai DNA ekstra-kromosom.

Apa saja ciri-ciri plasmid yang digunakan sebagai vektor?

Asal replikasi (on), penanda yang dapat dipilih, situs untuk restriksi endonuklease dan ukurannya, semuanya adalah fitur penting yang diperlukan untuk memfasilitasi kloning ke dalam vektor. Vektor DNA yang baik harus dapat bereplikasi secara mandiri dalam sel inang, yang harus memiliki tempat asal replikasi (ori).

Apa saja komponen penting dari plasmid yang digunakan dalam kloning?

komponen vektor kloning plasmid:

tempat asal replikasi (ori) tempat replikasi DNA dimulai.
gen penanda untuk seleksi dan/atau penyaringan.
Situs endonuklease restriksi (RE) yang unik. – memungkinkan sisipan untuk dikloning di situs tertentu pada plasmid.
kemampuan menular.
Promotor untuk ekspresi gen.

Bagaimana plasmid digunakan dalam kloning gen?

Plasmid sering digunakan dalam kloning gen sebagai vektor pembawa gen. Plasmid diisolasi dan diperlakukan dengan enzim restriksi yang sama dengan gen target. Plasmid akan bercampur dengan gen target dan molekul DNA rekombinan dihasilkan. Plasmid rekombinan diambil oleh sel bakteri.

Apa dasar-dasar kloning?

Alur kerja kloning dasar mencakup empat langkah:

Isolasi fragmen DNA target (sering disebut sebagai sisipan)
Ligasi sisipan ke dalam vektor kloning yang sesuai, menciptakan molekul rekombinan (misalnya, plasmid)
Transformasi plasmid rekombinan menjadi bakteri atau inang lain yang cocok untuk perbanyakan.

Bagaimana langkah-langkah kloning DNA?

Langkah-langkah kloning DNA

Buka plasmid dan “tempel” di gen. Proses ini bergantung pada enzim restriksi (yang memotong DNA) dan DNA ligase (yang menggabungkan DNA).
Masukkan plasmid ke dalam bakteri.
Tumbuhkan banyak bakteri pembawa plasmid dan gunakan sebagai “pabrik” untuk membuat protein.

Apa itu kloning PCR?

Kloning PCR adalah metode di mana fragmen DNA beruntai ganda yang diamplifikasi oleh PCR diikat langsung ke dalam vektor. Kloning TA dan kloning ujung tumpul mewakili dua metode kloning PCR yang paling sederhana. Pilihan mereka tergantung pada sifat vektor dan jenis enzim PCR yang digunakan dalam kloning.

Apakah PCR diperlukan untuk kloning?

Kloning PCR adalah metode cepat untuk mengkloning gen, dan sering digunakan untuk proyek yang membutuhkan throughput lebih tinggi daripada yang dapat diakomodasi oleh metode kloning tradisional. Ini memungkinkan kloning fragmen DNA yang tidak tersedia dalam jumlah besar. Kloning PCR awal sering menggunakan Taq DNA Polymerase untuk mengamplifikasi gen.

Apa perbedaan antara replikasi DNA dan kloning?

Perbedaan mendasar antara kedua metode adalah kloning molekuler melibatkan replikasi DNA dalam mikroorganisme hidup, sedangkan PCR mereplikasi DNA dalam larutan in vitro, bebas dari sel hidup.

Apakah PCR memiliki batasan?

Meskipun PCR adalah teknik yang berharga, teknik ini memiliki keterbatasan. Karena PCR adalah teknik yang sangat sensitif, segala bentuk kontaminasi sampel oleh DNA dalam jumlah sedikit pun dapat menghasilkan hasil yang menyesatkan (Bolognia et al, 2008; Smith & Osborn, 2009).

Mengapa PCR gagal?

Biasanya hal pertama yang dilakukan peneliti adalah menyalahkan enzim atau reagen yang salah ketika eksperimen gagal tetapi dengan PCR hal ini sebenarnya kecil kemungkinannya menjadi penyebab kegagalan. Lebih sering masalah internal yang lebih dalam seperti desain primer, parameter thermocycler, atau pengikatan nonspesifik ke urutan template lainnya adalah penyebabnya.

Apa keuntungan dan kerugian menggunakan PCR?

Tabel 1

Keuntungan PCR	Kekurangan PCR
Terbukti lebih hemat biaya dengan penggunaan selektif daripada kultur dan pewarnaan	Menjadi kurang hemat biaya bila dilakukan dengan pendekatan PCR multi-organisme
Peningkatan kemampuan untuk mendeteksi organisme yang kurang umum seperti virus	Biaya pasokan, biaya mesin, biaya pelatihan