Safranin – ciri, penggunaan, teknik, toksisitas

Safranin adalah pewarna meriquinoid, dinamai berdasarkan struktur kimianya dari 2 cincin benzenoid dan 2 cincin quinoid, yang terakhir memberikan warna merah.

Ini juga disebut dimethyl safranin atau basic red 2 dalam bentuk singkatnya, karena nama ilmiahnya adalah 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-phenyl-phenaziniumchlorodimethyl safranin dan rumus kimianya adalah C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Ada varian yang disebut trimethyl-safranin tetapi tidak ada perbedaan yang signifikan antara kedua zat tersebut.

Safranin adalah pewarna monokromatik dan, sesuai dengan karakteristik rumus kimianya, merupakan zat bermuatan positif. Oleh karena itu, ia memiliki afinitas untuk struktur bermuatan negatif. Struktur ini akan diwarnai merah.

Properti ini memberikan penerapan dalam banyak teknik histologis untuk menodai berbagai struktur sel, baik pada organisme eukariotik maupun prokariotik.

Safranin digunakan sebagai counterstain dalam teknik penggunaan rutin yang penting dan terkenal dalam bakteriologi. Teknik-teknik ini adalah: Pewarnaan Gram-Hucker, Pewarnaan Schaeffer Fulton untuk spora atau pewarnaan kapsul bakteri, antara lain.

Karakteristik

Warna saffron (bumbu yang didapat dari putik bunga Crocus sativus ) menjadi inspirasi penamaan pewarna ini. Dari istilah saffron muncullah nama safranin. Ini karena kemiripan yang besar antara warna kunyit dan pewarnaan yang diberikan oleh pewarna ini.

Safranin tersedia sebagai kristal atau bubuk, keduanya larut dalam air. Noda safranin tidak berbau. Noda struktur merah. Struktur yang menarik pewarna safranin disebut safranofil.

Secara struktural, safranin bersifat kompleks, memiliki dua cincin benzenoid di ujungnya dan dua cincin quinoid tempat kation N ^{+ berada terletak di tengah} . Pusat struktur adalah sistem yang bertugas memberikan warna. Karena karakteristik ini, pewarna ini diklasifikasikan dalam kategori II.

Menggunakan

Safranin digunakan untuk menodai berbagai struktur. Ini terutama menyoroti sel Kulchitsky yang ada di saluran pencernaan, juga disebut sel enterochromaffin.

Itu mampu menodai mikroorganisme milik keluarga Rickettsiaceae. Demikian pula, digunakan dalam berbagai teknik, seperti metode Koster, metode modifikasi yang digunakan untuk pewarnaan bakteri genus Brucella.

Di sisi lain, safranin digunakan dalam teknik pewarnaan spora Schaeffer Fulton dan pewarnaan Gram-Hucker. Dalam kedua teknik tersebut, safranin berfungsi sebagai counterstain.

Yang pertama, spora berwarna hijau perunggu dan struktur lainnya diwarnai merah oleh safranin. Yang kedua, bakteri Gram-negatif kehilangan warna ungu kristal pada langkah dekolorisasi, oleh karena itu safranin adalah yang menodai bakteri Gram-negatif menjadi merah.

Selain itu, safranin digunakan dalam bakteriologi untuk menyiapkan media agar Brucella dengan pengenceran safranin 1:5000. Media ini berfungsi untuk membedakan spesies Brucella suis dari spesies lainnya. Brucella melitensis dan Brucella abortus tumbuh pada media ini tetapi B. suis terhambat.

Di bidang agroindustri, safranin telah digunakan sebanyak 2,25% dan diencerkan 1:10 untuk menodai sampel batang tanaman tebu.

Tanaman ini umumnya terkena bakteri Leifsonia xyli subsp. xyli, yang merusak xilem tanaman. Batang yang diwarnai dievaluasi untuk menentukan fungsi pembuluh xylem.

Teknik di bidang bakteriologi

Pewarnaan Castaneda untuk pewarnaan rickettsial

Apusan darah atau jaringan ditempatkan dalam larutan buffer (buffer fosfat pH 7,6). Biarkan mengering secara spontan lalu tutupi dengan metilen biru selama 3 menit dan warnai kembali dengan safranin. Rickettsia berwarna biru, kontras dengan latar belakang merah.

Noda Koster yang dimodifikasi untuk Brucella

Apusan dibuat dan dinyalakan di pembakar untuk fiksasinya. Selanjutnya, ditutup dengan campuran 2 bagian safranin encer jenuh dengan 3 bagian larutan 1 mol/L KOH, selama 1 menit. Cuci dengan air suling dan counterstain dengan 1% karbol metilen biru.

Jika sampel mengandung bakteri dari genus Brucella, ini akan tampak oranye dengan latar belakang biru.

Pewarnaan kapsul bakteri

Campuran suspensi bakteri dengan tinta India dibuat dan ditambahkan safranin. Di bawah mikroskop akan terlihat lingkaran kemerahan di sekitar setiap kapsul bakteri dengan latar belakang hitam.

Pewarnaan Spora Schaeffer Fulton

Apusan dibuat dengan suspensi bakteri. Kemudian panas diperbaiki. Itu ditutupi dengan hijau perunggu pada 5%, sering menyala sampai emisi uap. Proses ini diulangi selama 6-10 menit. Terakhir, dicuci dengan air dan diwarnai kembali dengan safranin 0,5% selama 30 detik. Basil berwarna merah dan spora berwarna hijau.

Pewarnaan Gram-Hucker

Apusan dibuat dengan suspensi bakteri dan difiksasi dengan panas. Slide ditutup dengan kristal violet selama 1 menit. Lugol kemudian ditempatkan sebagai larutan morden selama 1 menit. Selanjutnya, diputihkan dengan aseton alkohol dan terakhir diwarnai dengan safranin selama 30 detik.

Bakteri gram positif berwarna ungu kebiruan dan bakteri gram negatif berwarna merah.

Beberapa laboratorium telah berhenti menggunakan teknik Gram-Hucker untuk mengadopsi teknik Gram-Kopeloff yang dimodifikasi. Yang terakhir, safranin digantikan oleh fuchsin dasar. Hal ini karena safranin dengan lemah menodai spesies dari genus Legionella, Campylobacter, dan Brucella.

Teknik di bidang histologi

Pewarnaan sel Kulchitsky (enterochromaffin)

Bagian jaringan saluran pencernaan diwarnai dengan perak klorida. Kemudian diputihkan dengan natrium tiosulfat dan akhirnya diimbangi dengan safranin.

Sel Kulchitsky dibedakan dengan penyajiannya dengan butiran coklat kehitaman.

Pewarnaan untuk deteksi osteoarthritis

Karena muatan positifnya, safranin mengikat dengan sangat baik pada gugus karboksil dan sulfat glikosaminoglikan. Ini adalah bagian dari proteoglikan yang membentuk tulang rawan artikular. Dalam pengertian ini, dengan pewarnaan dengan safranin O, dapat diketahui ada atau tidaknya tulang rawan yang hilang.

Hilangnya jaringan tulang rawan dapat diukur melalui skala Mankin atau disebut juga skala osteoarthritis.

Tekniknya dijelaskan di bawah ini: bagian histologis direndam dalam nampan dengan larutan hematoksilin besi Weigert, kemudian dilewatkan melalui alkohol asam dan dicuci dengan air.

Lanjutkan proses pewarnaan dengan merendam slide dalam fast green, cuci dengan asam asetat dan sekarang rendam dalam safranin O. Untuk menyelesaikan proses, dehidrasi menggunakan alkohol dengan konsentrasi berbeda dalam urutan menaik. Langkah terakhir membutuhkan xylene atau xylol agar sampel menjadi jernih.

Lembaran tersebut dikondisikan dengan balsam Kanada atau sejenisnya untuk diamati di bawah mikroskop.

Dengan teknik ini, inti diwarnai hitam, tulang hijau, dan tulang rawan tempat proteoglikan ditemukan berwarna merah.

Pewarnaan untuk identifikasi makroalga

Pérez et al pada tahun 2003 mengusulkan teknik sederhana dan murah untuk mewarnai makroalga. Sampel disiapkan di bagian histologis dengan parafin. Bagian diperbaiki dengan 1% gliserin, memungkinkannya benar-benar kering. Kemudian ditempatkan di xylol untuk menghilangkan parafin.

Bagian tersebut direhidrasi, melewatkannya melalui serangkaian baki yang berisi etanol dalam berbagai tingkat konsentrasi (urutan menurun), selama 2 menit di masing-masing baki.

Selanjutnya, diwarnai selama 5 menit dengan campuran 3:1 safranin 1% dengan toluidin biru 1%, keduanya dibuat dengan etanol 50%. Tiga tetes asam pikrat ditambahkan ke dalam campuran, yang bertindak sebagai mordan.

Kemudian didehidrasi dengan melewati baki alkohol lagi, tapi kali ini ke atas. Terakhir dibersihkan dengan xylol dan sampel dipreparasi dengan canada balsam untuk diamati.

Toksisitas

Untungnya, safranin adalah pewarna yang tidak menimbulkan bahaya bagi siapa pun yang menanganinya. Ini adalah pewarna yang tidak berbahaya, tidak karsinogenik dan juga tidak mudah terbakar.

Kontak langsung dengan kulit atau selaput lendir dapat menyebabkan sedikit kemerahan pada area tersebut, tanpa komplikasi besar. Untuk melakukan ini, disarankan untuk mencuci area yang terkena dengan banyak air.

Referensi

1. García H. Safranin pewarna O. Teknik kesehatan, 2012; 1(2):83-85. Tersedia di: medigraphic.com
2. Pewarnaan Gil M. Gram: alas bedak, bahan, teknik, dan kegunaan. 2019. Tersedia di: lifeder.com
3. Pewarnaan Gil M. Spore: alasan, teknik, dan penggunaan. 2019. Tersedia di: lifeder.com
4. Safranin.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas. 7 Maret 2017 10:39 UTC. 3 Agustus 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Teknik pewarnaan yang berguna dalam interpretasi anatomi tenuifron Gracilariopsis dan Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Undang-Undang Bot. Venesia. 2003; 26(2):237-244. Tersedia di: scielo.org.
6. Gereja Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Hubungan antara fungsi pembuluh xilem dan keberadaan Leifsonia xyli subsp. xyli. Pendeta Perlindungan Veg. 2007; 22(1): 65-65. Tersedia di: scielo.sld